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    MC1000 8 通道藻類培養與在線監測系統應用案例

    發布時間: 2024-05-30  點擊次數: 1117次

    MC1000 8通道藻類培養與在線監測系統,是由8100ml藻類培養試管、水浴控溫系統、多色LEDs光源控制系統及光密度和溶解氧(選配)在線監測系統等組成的專業藻類培養設備,可用于藻類培養與控制實驗、梯度對比實驗等,適于碳同化研究、水體生態毒理學研究檢測、藻類生理生態研究、水生態研究等。

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    案例一:通過遺傳和環境協同擾動手段獲得耐高溫高光藍突變體

    光合作用是地球上最重要的生化過程之一,但高光和高溫(HLHT)脅迫會損害光合作用的效率。提高光自養生物對HLHT的耐受性對于農業和其他依賴光合作用的經濟活動至關重要。然而目前獲得耐HLHT光自養生物費費力,其潛在的分子機制也暫不明確。

    在中國科學院青島生物能源與過程研究所的一項研究中開發了一套高突變系統,通過基因遺傳保真元件敲除、誘變元件表達的策略,結合高溫高光培養,將藍藻的突變率提高了三個數量級。利用這個高突變系統,研究人員快速獲得了HLHT耐受能力顯著提高的突變藻株,并揭示影響藍HLHT耐受能力的關鍵靶點與功能機制

    其中,高突變系統的高溫高光環境,即為MC1000多通道藻類培養與在線監測系統提供,研究中使用MC1000設置不同的溫度光強條件給聚球藻施加環境壓力,觸發聚球藻高突變狀態。另外,藻的預培養、相對突變率評估、分離出的突變藻株培養、耐高溫高光評估等,也均在MC1000中設定相應培養條件進行。易科泰為中科院能源所提供了多套不同配置的MC1000,這些設備也在為研究人員的多種實驗不斷工作著。

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    案例二:輻照度和無機碳利用率對長柄聚球菌PCC 7942異源蔗糖產量的影響

    蔗糖是生物乙醇的重要原料,也是許多高附加值化學品的有前景的基石。植物是蔗糖的主要來源,但由于耕地和水資源利用倫理問題等原因,尋找另一種蔗糖來源以替代植物十分必要。藍藻細菌已被認為是一種潛在的碳水化合物原料,多種物種已被成功地設計分泌,但不同模式物種之間,蔗糖生產力存在相當大的差異。研究案例中,不同的實驗室設備和生長條件(特別是光照、CO2和培養器類型)如何影響藍藻的蔗糖生產進行了系統評估。

    其中,便利用MC1000進行了藍藻光耐受性和蔗糖生產力評估,使用的藍藻為蔗糖滲透酶 (cscB)和蔗糖磷酸合酶(sps)表達的特定藻株S. elongatus。實驗中,將培養溫度設定為32℃,通3CO2氣體,分別用150,250,500,1000,2000μmol/m2/s光強(冷白光)培養,在0,24h,48h,72h分別檢測藻液的OD750及蔗糖含量。

    結果可知,野生型(WT)和不生產蔗糖的藻株(non-exporting cscB/spsOD750在幾個光強下均可以達到2.2,而S. elongatusOD750則較低,這是因為它將固定的碳更多的用來生產蔗糖,導致其細胞生長受限,生物量下降。用于藍藻培養的輻照度與蔗糖生產力之間存在直接關系,500μmol/m2/s時達到最大,而當光強超過這個閾值,其蔗糖產量則開始下降。

    但在進一步的實驗中,將藻株的初始接種濃度提高,使用20002500μmol/m2/s光強培養,其蔗糖產量則有所上升,高光強度被S. elongatus耐受,特別是在高密度培養下,可能是其濁度減弱培養物中透過的有效光照。正是MC1000高光強、多通道的配置為實驗提供了培養和檢測條件。

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    案例二:碳通量調節蛋白pirC對工程藍藻乙醇生產的影響

    由于人類活動導致的大氣中CO2濃度上升是全球氣候變化的主要因素之一。為了減少對化石碳源的依賴,需要尋找可持續的CO2利用過程,如利用光合自養微生物(例如藍碳同化途徑進行生物質的生成。藍藻作為可持續生物經濟的有前景的工程底盤,但目前菌株通常生產力較低,工業應用受限。通過基因工程改造藍細菌,可以提高其生產乙醇等有價值產品的效率,從而為可持續能源生產提供新的可能性。

    本研究案例使用了改造后的藍藻Synechocystis sp. PCC 6803,該藍藻通過表達來自Zymomonas mobilis的丙酮酸脫羧酶(PDC)和來自Synechocystis sp. PCC 6803的乙醇脫氫酶(ADH)來產生乙醇。通過敲除調節蛋白pirC的基因,在不同的氮或碳條件下培養株,并分析乙醇產量研究pirC對乙醇產量的影響。

    乙醇生產實驗在MC1000中進行,培養過程中使用MC1000連續自動測量720nm光密度(OD720),并在第0357天采樣手動測定OD720。培養過程中,排出的氣體流入收集瓶,量化了培養容器造成的揮發性乙醇的損失。在培養物的第3、5、7天提取乙醇定量樣品。第7天進行代謝物定量。

     

    結果發現,藻株生長速率和乙醇產量之間存在明顯的相關性。經過之后更多實驗證明,pirC的突變在氮耗竭條件下對乙醇生產有積極影響。乙醇產量的增加伴隨著丙酮酸水平的升高和糖原水平的降低,表明pirC的缺失確實增加了碳向較低糖酵解途徑的分配。

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    參考文獻:

    [1] Sun H, Luan G, Ma Y, et al. Engineered hypermutation adapts cyanobacterial photosynthesis to combined high light and high temperature stress[J]. Nature Communications, 2023, 14(1): 1238.

    [2] Yun L, Zegarac R, Ducat D C. Impact of irradiance and inorganic carbon availability on heterologous sucrose production in Synechococcus elongatus PCC 7942[J]. Frontiers in Plant Science, 2024, 15: 1378573.

    [3] B?hm J, Kauss K, Michl K, et al. Impact of the carbon flux regulator protein pirC on ethanol production in engineered cyanobacteria[J]. Frontiers in Microbiology, 2023, 14: 1238737.

     

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